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  • 转染试剂的操作方法及简单又快速,为您节约大量时间
  • 点击次数:227 发布时间:2018-09-26
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  •   转染试剂,是由它的体外转染试剂加上一些专有的肽配制而成。与传统的配方相比,这款运用了新的化学试剂,DNA浓缩组被显著地释放。主链上连上具有屏蔽效应的肽,用来防止被体内环境的干扰,获得高的体内转染效率。实验表明, GenJet? Plus 能在肺,脾,肝和肾上获得zui好的renilla荧光素酶的表达。
     
      转染试剂指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。哺乳动物的转染技术在60年代末70年代初即已引入。DNA转染技术的发展对现代分子生物学产生了巨大的影响。基因转染技术不仅是研究转基因和基因表达的重要工具,而且是目前基因治疗的关键步骤。理想的基因转染试剂应该具有如下特点:1.高效转染;2.安全;3.低细胞毒性;4.方法简单;5.省时、经济。
     
      转染试剂工作原理:脂质体带正电,可以靠静电作用结合到DNA的磷酸骨架上以及带负电的细胞膜表面。使用阳离子脂质体试剂,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物。
     
      转染试剂操作简单、快速,为操作者节约大量操作时间。
     
      1. 以24孔细胞板转染实验为例,推荐一次(即每孔)转染实验的低内毒素质粒DNA用量为2µg、转染试剂用量为3~5µl(转染试剂的zui适用量需要根据不同细胞和不同培养基来优化,但理论上不超出3~5µl范围)。转染实验中使用无菌生理盐水稀释质粒和转染试剂即可。
     
      2. 为获得zui高转染效率并尽可能降低细胞毒性,建议转染时细胞密度控制在50~80%范围内,而且在不影响转染效率的前提下,尽可能减少转染试剂的用量。
     
      3. 本品极大简化了转染步骤,转染试剂和质粒混合后无需室温静置孵育,可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染,而且无需在转染后补加血清或更换培养基。
     
      4. 如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系,可在细胞传代后直接进行转染试剂实验,从而节省了18~24小时的转染前细胞培养时间!
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